目的  探究摩罗丹浓缩丸（Moluodan concentrated pill，MLD）治疗慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）潜在的分子机制。

方法  利用中药系统药理学数据库与分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）、中医药综合数据库（Traditional Chinese Medicine Integrated Database，TCMID）、中医药整合药理学研究平台（Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine，TCMIP）和中药免疫肿瘤学数据库（Traditional Chinese Medicine on Immuno-Oncology，TCMIO）获取MLD的化合物和化合物相关靶点（compound-related target，CRT）；DisGeNET和GeneCards数据库获取CAG相关靶点基因（CAG related target gene，CAG-RTG）；采用Cytoscape 3.7.2软件构建MLD化合物-CRT网络，并将CRT和CAG-RTG取交集获取MLD相关疾病靶点（MLD-related disease target，MLD-RDT）；利用STRING数据库构建MLD-RDT的蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络，并进行拓扑结构分析，筛选重要靶点。采用基因本体论（Gene Ontology，GO）富集分析与京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）信号通路富集分析探索MLD治疗CAG的主要分子机制。

结果  MLD中共有259个活性分子，获得961个靶基因，其中179个可能与CAG相关。PPI网络显示，AKT1、TNF、IL-6、TP53、IL-1β等是MLD治疗CAG的关键靶点。富集分析显示，MLD治疗CAG的关键通路为PI3K-AKT信号通路和TNF信号通路。

结论  MLD可能通过介导TNF/PI3K/AKT信号通路治疗CAG。

慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是消化系统常见的胃黏膜组织慢性炎症性疾病，可伴有或不伴有肠上皮化生及不典型增生[1]。粘膜萎缩、血管暴露和粘膜结节是CAG的主要特征[2]。CAG是一种癌前病变，其发生发展与幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori，HP）感染密切相关[3]。现有研究表明，“慢性非萎缩性胃炎-慢性萎缩性胃炎-肠上皮化生-非典型增生”是胃癌独特的进展模式[4]。CAG患者的胃癌发病率因地区和种族而差异较大，但在亚洲国家中最高[5]。因此，早期对CAG进行诊断和治疗对于阻断慢性胃炎的“炎症-癌症转化”过程、减缓胃癌进展至关重要。

中医药在CAG的临床诊疗中发挥重要作用[6]。摩罗丹浓缩丸（Moluodan concentrated pill，MLD）是一种专利中药，由百合、茯苓、白术、三七等18种中药组成，可有效治疗CAG[7-8]。《中成药治疗慢性胃炎临床应用指南》[9]推荐MLD用于胃癌癌前病变的治疗，特别是轻度不典型增生。既往研究显示，与叶酸联合维生素E治疗相比，MLD能更有效地改善胃粘膜萎缩、肠上皮化生和低级别上皮内瘤变[10]。此外，与标准雷贝拉唑三联治疗相比，MLD联合雷贝拉唑三联治疗HP阳性胃炎患者疗效更显著，临床症状改善更明显[7, 11]。然而，MLD在CAG治疗中的确切作用机制尚不明确。网络药理学是一种结合系统生物学、网络分析、连接性、冗余性和多态性的药物设计方法，为中药基础研究提供了一种新的途径[12]。本研究拟采用网络药理学探索MLD治疗CAG的可能机制，为MLD的临床应用提供理论支持。

1 资料与方法

1.1 数据获取

利用中药系统药理学数据库与分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，TCMSP）（https://www.tcmsp-e.com/#/database）、中医药综合数据库（Traditional Chinese Medicine Integrated Database，TCMID）（https://ngdc.cncb.ac.cn/databasecommons/database/id/437）、中医药整合药理学研究平台（Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine，TCMIP）（http://www.tcmip.cn/）、中药免疫肿瘤学数据库（Traditional Chinese Medicine on Immuno-Oncology，TCMIO）（http://tcmio.xielab.net/）获取MLD所有单药的化合物及化合物相关靶点（compound-related target，CRT）。以口服利用度 ≥0.3和口服利用度≥0.18为化合物筛选条件。

采用DisGeNET（https://www.disgenet.org/）和GeneCards（https://www.genecards.org/）数据库进行疾病鉴定。以“Chronic atrophic gastritis”为关键词收集CAG相关靶点基因，共获取884个CAG相关靶点基因（CAG related target gene，CAG-RTG）。

1.2 网络构建

采用Cytoscape 3.7.2软件构建MLD化合物-CRT网络。将CRT和CAG-RTG取交集获取MLD相关疾病靶点（MLD-related disease target，MLD-RDT）。利用STRING数据库（https://string-db.org/）构建MLD-RDT的蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络，设置如下筛选条件：①“Homo sapiens”；②“minimum required interaction score=0.9”；③“hide disconnected nodes”。采用Cytoscape 3.7.2软件对PPI网络进行可视化，并进行拓扑结构分析，筛选重要靶点。

1.3 生物信息学分析

对MLD-RDT进行基因本体论（Gene Ontology，GO）富集分析和京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路分析，以进一步探索MLD治疗CAG的生物学功能。生物信息学分析基于Hiplot生物医学可视化平台（https://hiplot.com.cn/）进行。

2 结果

2.1 MLD化合物、化合物靶点和疾病靶点鉴定

共获取MLD化合物827个。利用PubMed数据库进行检索，排除重复或不相关化合物，最终获取259个化合物，并确定961个CRT。通过DisGeNET和GeneCards数据库共获取884个CAG-RTG。

2.2 化合物-CRT网络构建

根据鉴定的MLD化合物和CRT构建化合物-CRT网络，见图1。该网络包括558个节点和3 395条边，展示了化合物和靶点之间的相互作用关系。其中，没食子酸、哈巴苷、芍药苷、香蒲新甙、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、三七皂苷 R1、人参皂苷Rg1、玄参甙和人参皂苷Rb1为主要化合物，其来源详见表1。

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  图1 MLD化合物-CRT网络图

  Figure 1.The compound-CRT network of MLD

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  表格1 MLD中化合物来源

  Table 1.Source of compounds in MLD

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2.3 PPI网络分析

通过CRT与CAG-RTG取交集，共获取179个靶点用于PPI网络分析（图2）。采用Cytoscape网络分析插件计算PPI网络中平均最短路径长度和中心度。如表2所示，AKT1、TNF、IL-6、TP53、IL-1β等是MLD治疗CAG的重要靶点。

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  图2 MLD和CAG靶点韦恩图

  Figure 2.Venn diagram of MLD and CAG targets

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  表格2 排名前10的靶点核心参数

  Table 2.Core parameters of the top 10 targets

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2.4 GO和KEGG通路富集分析

在GO分析中，生物过程（biologic process，BP）、细胞组成（cellular composition，CC）、分子功能（molecular function，MF）富集的前10个项目如图3所示，包括炎症反应和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性，两者均与CAG的病理生理有显著的直接相关性。此外，KEGG富集分析显示，相互作用的靶点与10条CAG相关通路相关，包括TNF信号通路和PI3K/AKT信号通路，详见图4、图5。

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  图3 GO富集分析

  Figure 3.GO enrichment analysis

  注：BP. 生物过程；CC. 细胞组成；MF. 分子功能。

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  图4 KEGG通路富集分析

  Figure 4.KEGG pathway enrichment analysis

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  图5 TNF信号通路

  Figure 5.TNF signaling pathway

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3 讨论

CAG是一种常见的胃肠道疾病，若处理不当，将会增加胃癌风险。中医以其独特的优势在CAG治疗中发挥重要作用。临床指南指出，MLD具有协调胃脾、消除气滞、激活血液循环、缓解疼痛等作用[9]。本研究基于网络药理学分析初步探讨了MLD治疗CAG的机制，发现MLD可能通过调节TNF/PI3K/AKT信号通路治疗CAG。

PPI网络分析显示，TNF和AKT1可能是MLD治疗CAG的关键靶点。TNF是一种由巨噬细胞分泌产生的炎症细胞因子。一定含量的TNF对机体具有保护作用，可使机体免受病原体侵害[13]。此外，TNF还与胃癌的发生发展密切相关[14]。有研究显示，CAG大鼠模型血清TNF表达水平显著上调，CAG患者血清TNF含量也显著上升，且经治疗后下降[13, 15]；HP相关性胃炎患者胃黏膜中TNF-α的表达增加[16]。AKT1属于丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶家族成员，是AKT的一种亚型。研究表明，CAG与蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性相关[17]，且有动物实验显示，CAG大鼠AKT1表达水平上调[18]。上述研究均表明TNF和AKT1在CAG的发生发展中发挥重要作用。

GO和KEGG通路富集分析显示，MLD可能主要通过10个关键信号通路干扰炎症反应和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性，从而发挥疗效。CAG的发生发展与HP感染密切相关。与其他感染不同，HP可能在宿主整个生命活动中存活，即便是在炎症反应消失以后[19]。TNF-α信号通路与胃肿瘤的发展密切相关，此外，TNF信号通路还可介导胃炎向胃癌的转化过程[20]。TNF信号通路的下游是PI3K/AKT信号通路，根据KEGG的分析结果，其为第二个关键的信号通路。TNF和PI3K/AKT信号通路的激活可触发炎症和免疫抑制[21]，因此，抑制TNF/PI3K/AKT信号通路对CAG的治疗至关重要。

综上所述，MLD可能通过介导TNF/PI3K/AKT信号通路治疗CAG，为进一步研究其作用机制提供了思路。然而，由于数据库信息有限及缺乏试验验证，MLD对TNF信号通路的调控是否与CAG的进展和预后相联系，仍需进一步研究。

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